Ackles nació el 1° de Marzo de 1978 en Dallas, y se crió en Richardson, Texas. Se graduó de la Dartmouth Elementary en Richardson, Texas en 1990. Estudió la Junior High School en Apollo Junior High, , de donde se gradua en 1993, y en 1996 se gradúa de la LV Berkner High School en Richardson, Texas. En 1997, inició su carrera actoral con muchos elogios cuando se unió al casting de Days of Our Lives, en el personaje de "Eric Brady", además de tres nominaciones al Emmy (1998, 1999 y 2000). Él ganó el Soap Opera Digest Award por Mejor Actor Nuevo en 1998. Estelarizó una serie de FOX titulada Still Life que se supone sería una serie de mitad de temporada, pero obviamente nunca se materializó. Ackles fue visto como "C.J." en Dawson´s Creek en un papel recurrente y como "Alec" en la segunda temporada de Dark Angel como un personaje regular. Su trabajo adicional en televisión incluye co-estelar en la miniserie Blonde, frente a Poppy Montgomery y Patrick Dempsey Ackles fue uno de los jovenes que audiciono para el papel de Clark Kent en la serie "Smallville" en el año 2000. Pero no lo consiguio. Sin embargo, pudo participar luego en la serie en su cuarta temporada como Jason Teague.